葵花籽油中16种邻苯二甲酸酯的分析方法
方法来源：博纳艾杰尔
摘要：本实验重现了GB5009.271-2016食品中邻苯二甲酸酯的国家标准，采用Cleanert PSA/Silica固相萃取柱结合气相色谱串联质谱的方法(GC/MS)对葵花籽油中16种邻苯二甲酸酯进行了测定。样品经乙腈提取，Cleanert PSA/Silica小柱净化，GC/MS进行检测，外标法定量。结果表明，当加标量为0.8 mg/kg时，回收率在70% ~ 115%之间，能够满足检测要求。
关键词：邻苯二甲酸酯；Cleanert PSA/Silica；GC/MS
前言
邻苯二甲酸酯，又称酞酸酯，缩写PAEs，是邻苯二甲酸形成的酯的统称。当被用作塑料增塑剂时，一般指的是邻苯二甲酸与4～15个碳的醇形成的酯。邻苯二甲酸酯主要用于聚氯乙烯材料，令聚氯乙烯由硬塑胶变为有弹性的塑胶，起到增塑剂的作用。它被普遍应用于玩具、食品包装材料、医用血袋和胶管、乙烯地板和壁纸、清洁剂、润滑油、个人护理用品（如指甲油、头发喷雾剂、香皂和洗发液）等数百种产品中，但对人体的健康有严重的危害。一般人容易会在塑胶制品包装中接触到邻苯二甲酸酯类，在生活中有很多食物在加工、加热、包装、盛装的过程里可能会造成邻苯二甲酸酯的溶出且渗入食物中。含有邻苯二甲酸酯的软塑料玩具及儿童用品有可能被小孩放进口中，如果放置的时间足够长，就会导致邻苯二甲酸酯的溶出量超过安全水平，会危害儿童的肝脏和肾脏，也可引起儿童性早熟。
本文通过重现国标，建立了CleanertPSA/Silica固相萃取柱净化葵花籽油中邻苯二甲酸酯的前处理方法。
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备
Agilent7890-5975C气相色谱串联质谱仪
试剂材料
乙腈、丙酮为色谱纯；正己烷、二氯甲烷均为农残级；
16种邻苯二甲酸酯混合标准品（纯度99%）：正己烷溶解；
Cleanert PSA/Silica：1g/6 mL。
样品制备
样品提取
称取均匀的葵花籽油样品0.5 g，加入100 µL正己烷，2 mL乙腈，涡旋1 min，超声提取20 min，4000 r/min离心5 min，转移上清液于另一干净玻璃瓶中，残渣加入2 mL乙腈，涡旋1 min，4000 r/min离心5 min，转移上清液，残渣再加入2 mL乙腈提取一次。合并3次上清液，作为待净化液。
样品净化
将Cleanert PSA/Silica小柱依次用5 mL二氯甲烷，5 mL乙腈活化，弃去流出液。将上述待净化液上样于Cleanert PSA/Silica小柱上，收集流出液，再用5 mL乙腈洗脱小柱，收集流出液。合并两次流出液，加入1 mL丙酮，于40℃氮吹至近干，用正己烷定容至2 mL，涡旋混匀，供气质检测。
基质混合标准工作溶液
取高浓度16种邻苯二甲酸酯混合标准溶液，用空白样品基质溶液稀释成0.2 µg/mL的基质混合标准工作溶液。
注：实验中应避免使用塑料制品。
实验条件
色谱柱：DA-5MS色谱柱，30 m × 0.25 mm × 0.25 µm；
进样口温度：260℃；柱温：初始温度60℃，保持1 min，以20℃/min 升至220℃，保持1 min，再以5℃/ min升至250℃保持1 min；再以20℃/min升温至290℃，保持7.5min。
载气：氦气，纯度≥99.999％
流速：1 mL/min；
电离方式：EI源。
离子源温度：230℃；
溶剂延迟：7 min；
进样方式：不分流进样；
样量：1 µL；
监测方式：选择离子扫描（SIM）。
表1. 16种邻苯二甲酸酯监测离子参数
| 物质名称 | 定性离子（m/z） | 定量离子（m/z） |
| 邻苯二甲酸二甲酯DMP | 163，77，194，133 | 163 |
| 邻苯二甲酸二乙酯DEP | 149,177,105,222 | 149 |
| 邻苯二甲酸二异丁酯DIBP | 149,223,104,167 | 149 |
| 邻苯二甲酸二正丁酯DBP | 149,223,205,104 | 149 |
| 邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP | 59,149,104,176 | 149 |
| 邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP | 149，167，85，251 | 149 |
| 邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯DEEP | 72,149,104,193 | 149 |
| 邻苯二甲酸二戊酯DPP | 149,237,219,104 | 149 |
| 邻苯二甲酸二己酯DHXP | 149,251,104,233 | 149 |
| 邻苯二甲酸丁基苄基酯BBP | 149，91，206，104 | 149 |
| 邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯DBEP | 149，101，85，193 | 149 |
| 邻苯二甲酸二环己酯DCHP | 149,167,249,104 | 149 |
| 邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯DEHP | 149,167,279,113 | 149 |
| 邻苯二甲酸二苯酯DPhP | 225，77，104，153 | 225 |
| 邻苯二甲酸二正辛酯DNOP | 149,279,104,261 | 149 |
| 邻苯二甲酸二壬酯DNP | 149,293,167,275 | 149 |
结果与讨论
实验结果
由表2可知，采用固相萃取结合GC/MS的方法检测葵花籽油中的16种邻苯二甲酸酯，加标回收率在70% ~ 115%之间，能够满足标准要求。由图1、图2、图3可知，用DA-5MS色谱柱检测16种邻苯二甲酸酯，峰形良好且保留时间稳定。
表2. 葵花籽油中16种邻苯二甲酸酯加标回收实验结果(添加水平0.8 mg/kg)
| 物质名称 | 保留时间/min | 平均回收率/% | 变异系数/% |
| 邻苯二甲酸二甲酯DMP | 7.898 | 80.2 | 0.5 |
| 邻苯二甲酸二乙酯DEP | 8.765 | 87.5 | 1.2 |
| 邻苯二甲酸二异丁酯DIBP | 10.596 | 77.4 | 4.7 |
| 邻苯二甲酸二正丁酯DBP | 11.401 | 78.6 | 4.3 |
| 邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP | 11.717 | 81.6 | 9 |
| 邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP | 12.452 | 88 | 4 |
| 邻苯二甲酸二（2-乙氧基）乙酯DEEP | 12.85 | 86 | 3.4 |
| 邻苯二甲酸二戊酯DPP | 13.298 | 92.5 | 3.2 |
| 邻苯二甲酸二己酯DHXP | 15.564 | 110.7 | 3.8 |
| 邻苯二甲酸丁基苄基酯BBP | 15.706 | 85.7 | 2.4 |
| 邻苯二甲酸二（2-丁氧基）乙酯DBEP | 17.267 | 90.9 | 2.6 |
| 邻苯二甲酸二环己酯DCHP | 17.889 | 97 | 1.2 |
| 邻苯二甲酸二（2-乙基）己酯DEHP | 18.019 | 85.5 | 7 |
| 邻苯二甲酸二苯酯DPhP | 18.152 | 101.8 | 1.4 |
| 邻苯二甲酸二正辛酯DNOP | 19.711 | 83.4 | 1.9 |
| 邻苯二甲酸二壬酯DNP | 20.171 | 84.5 | 3.3 |
图1. 0.2 µg/mL16种邻苯二甲酸酯标准色谱图
结论
本实验重现GB5009.271-2016食品中邻苯二甲酸酯测定的国家标准，用CleanertPSA/Silica小柱结合气相色谱串联质谱的方法对葵花籽油中的16种邻苯二甲酸酯进行了测定。对于加标量为0.8mg/kg的样品，加标回收率在70%~ 115%之间，符合检测要求，且变异系数小于10%，稳定性良好。
附：相关标准品
